安曼生物反應器采用完全清潔不銹鋼設計,提供全自動CIP/SIP,五種攪拌槳能全方位滿足不同細胞的生長,控制系統基于ISA88設計,更加安全精確穩定,提供個性化需求定制的生物反應器,全面滿足客戶從小試、中試到規?;a全方位需求,下面結合AM-5L生物反應器無血清純懸浮培養CHO細胞的培養效果進行介紹。
一、培養背景
反應器:A&M 5L生物反應器
表達產物:一種融合蛋白,胞外分泌
細胞株:CHO/dhrf細胞懸浮培養株
培養基:HyQ SFM4CHO
搖瓶產量:200-300ug/ml左右,擴大體積培養后蛋白產量下降
二、培養條件
細胞生長期DO:50%
細胞生長期pH :7.2
細胞生長期T:37℃
細胞表達期T:34℃
轉速度:60rpm
收獲體積:3L
細胞培養期:共6天
細胞表達期:共4天
三、培養過程
培養過程:準備種子細胞0.8×106cells/ml,活率95%,1000ml打入生物反應器內,留少許樣品檢菌,設置好參數,啟動自動控制狀態,每天根據細胞密度、殘糖量、滲透壓補加培養基、濃縮液和堿,細胞狀態良好,如下:

表達過程:細胞密度和體積到達要求后,降溫轉表達。
四、培養數據:

細胞耗糖曲線:

細胞活率曲線:

蛋白表達量:

五、結果分析
1、細胞培養過程中每天取樣,觀察細胞狀態,檢測殘糖及滲透壓,計數及活率,補加培養基和濃縮液,細胞增殖正常,活率正常。
2、蛋白表達伴隨整個細胞生長過程,當活率低于80%時收獲下罐,以免其他代謝雜質增多不利于后期蛋白分離純化。
3、培養結果表明,在安曼5L生物反應器上擴大培養后,工藝參數控制精確穩定,細胞密度和表達量顯著提高。